富硒蛋白肽军工产品（富硒蛋白肽价格）

本发明涉及食品生物检测

技术领域：

，尤其涉及一种高营养富硒羊奶制备方法及其蛋白特征肽的表征应用，所述方法可以应用在对富硒羊奶的鉴定和评价中。

背景技术：

：羊奶在日常生活中是一种具有很高生物活性的营养来源，并且羊奶的消费量有增加的趋势，对牛乳过敏的一些婴幼儿和儿童也可以选择羊乳。羊乳可以显著改善胃肠道菌群结构。羊乳中矿物质均为可溶的，含有较多矿物质，钙磷比例适宜达到2:1水平，对于预防中老年人骨组织改变，羊乳是消费者理想的选择。和牛奶比较，羊奶球蛋白颗粒比较小，质量分数很高，因此羊乳相较于其他乳制品更易被人体消化利用。研究证实，和牛奶相比，羊奶中的乳汁中存在较高量的αs1-酪蛋白和αs2-酪蛋白。其中，αs2-酪蛋白是一个与αs1-酪蛋白不相同的类别，并已从广泛的物种中鉴定出来。αs2-酪蛋白由于难以分离和纯化可能是调查最少的蛋白质。但是，它首先在哺乳动物的奶中被发现，并且可占全部酪蛋白含量比高达29％。完整的αs2-酪蛋白的氨基酸序列由207个残基组成，带有含大量正电的侧链，尤其是在c端部分(stewartetal.1987)。αs2-酪蛋白含量的变化是产生山羊奶酪蛋白独特的物理化学特性的因素，这也解释了山羊奶和牛奶之间有很大一部分差异的特性的原因。随着生活水平的提高，富硒羊奶也逐步被大众所接受和认可，并成为商业化的热点。例如专利cn106993579a中公开了一种有机富硒羊奶的制备方法，主要是通过利用奶羊食用了大量的富硒草料和富硒饲料从而产生富硒羊奶。

专利cn108634000a中公开了一种富硒羊奶粉及其生产方法，主要是通过将普通羊奶粉与富硒谷物粉等混合制备成相应的产品。专利cn110558382a中公开了一种富硒奶的生产方法，通过首先培育富硒麦苗，然后将富硒麦苗按量让奶牛或羊等产奶动物食用，实现产出富硒奶。但是这些方法中制备获得的产品由于不同加工工艺等原因造成产品质量良莠不齐，缺乏相应的检测指标和标准，现有技术中没有建立针对羊奶含量、硒含量准确有效的评价检测方法。此外，羊奶原料、羊全脂奶粉等原材料成本较高。价格较低、产量较高的奶牛奶粉掺入羊奶粉的掺假现象频繁出现。因此迫切的需要一种可以特异性判断羊奶产品，尤其是富硒羊奶产品的方法。技术实现要素：针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于检测羊奶产品，尤其是富硒羊奶产品的特征肽及其组合。使用该特征肽组合可以准确检测样品中的羊奶含量，尤其是富硒羊奶的含量，具有较高的特异性、灵敏度、回收率和精密度。其中所述的特征肽选自：khkmehvss；同时，本申请还提供内标特征肽，其中所述的内标特征肽选自：khkm*ehvss，其中m*为碳氮全同位素标记的蛋氨酸；进一步的，本发明提供一种上述蛋白特征肽在富硒羊奶检测中的应用流程，包括如下步骤：第一步，利用石墨炉原子吸收法测定奶类样品中的总硒含量；第二步，利用特征肽确定奶类样品中的羊奶含量；第三步，获得产品分析结果。

进一步的，本发明提供上述步骤的具体参数，其中，第一步具体为：精确称取样品于聚四氟乙烯消化罐中，加入hno3溶液和h2o2溶液，拧紧外盖放入微波消化仪，进行微波消解，使用石墨炉原子吸收绘制标准曲线，测定样品中的总硒量。第二步具体包括如下步骤：步骤一：将奶类样品采用胰蛋白酶酶解处理：准确称取均匀待测样品至离心管中，加入去离子水，涡旋震荡，离心后收集上清液。准确吸取试样溶液，加入内标溶液，加入碳酸氢钠溶液涡旋混匀后，再加入dtt溶液在70℃水浴锅中反应。待冷却后加入iaa溶液静置后再加入碱性胰蛋白酶在37℃水浴锅中反应。最后加入甲酸溶液终止反应，用0.22μm微孔滤膜过滤，待测。步骤二：进行液质联用分析。步骤三：根据检测结果，计算待测样品中所述硒蛋白特征肽与其相对应的内标肽的峰面积比；步骤四：将所述峰面积比代入标准曲线中，计算得到待测样品中硒蛋白特征肽的浓度，最后计算得到样品中富硒αs2-酪蛋白的含量。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：(1)本发明首先通过石墨炉原子吸收法确定样品中的总硒含量，确定样品是否属于富硒产品；再通过筛选羊奶αs2-酪蛋白的特征肽，获取该特征肽相应的内标肽，并利用高效液相色谱与质谱联用的分析技术，实现了αs2-酪蛋白的定量检测，确定样品中的羊奶含量，该方法具有较好的线性、灵敏度、回收率和精密度。

(2)本发明提供了一种富硒羊奶的制备方法，通过该方法获得的富硒羊奶蛋白含量高、硒含量充足，可以作为产品质量检测中的阳性标准品。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为利用石墨炉原子吸收光谱法获得的硒含量标准曲线。图2为富硒αs2-酪蛋白的特征肽段khkmehvss的离子流图。图3为液质联用分析中富硒αs2-酪蛋白标签肽的浓度的标准曲线。具体实施方式以下通过实施例对本发明所述内容作进一步详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或更变，均应包括在本发明的范围内。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下列实施例中提及的“特征肽”是指人工合成的既未经同位素标记也未经同位素二甲基化标记的肽段，即：khkmehvss，也称为特异肽/特异肽段；“标签肽”是指特征肽经二甲基化标记后的肽段。

实施例1、富硒羊奶的生产方法1、配置富硒叶面肥，按照硒含量的2%海藻硒多糖7份、磷酸二氢钾3份、硫酸亚铁1份、甘氨酸锰络合物0.2份，蒸馏水定容至100份重量，配置备用。2、在富硒地区划片种植蛋白桑、构树、紫花苜蓿等低杆牧草；在低杆牧草生长过程中，每隔七天喷洒一次上述配置的富硒叶面肥，每亩每次喷施1000-2000ml，稀释30倍进行喷施，使低杆牧草含硒量达到5000μg/kg；3、收割富硒低杆牧草，把构树、紫花苜蓿、蛋白桑晾干储存待用；4、按照重量份（kg）1：1：1的比例来配置高硒牧草，其中高硒牧草包括以下原料：蛋白桑、紫花苜蓿、构树；5、按照重量份（kg）来配置高硒饲料，每40kg高硒饲料包括以下重量份的原料：硒含量2%粉末海藻硒多糖2份，玉米14份，豆粕6份，麦麸12份，脂肪粉2份，高蛋乳清粉1.2份，包被益生菌0.02份，酵母培养物1.4份，脂肪酸钙0.3份，氧化镁0.06份，苏打0.3份，葡萄糖0.2份，食盐0.22份，复合维生素0.3份；其中，所述的包被益生菌，具体操作为：a、种子培养：选择市场上常规的商业化富硒酵母，将富硒酵母菌种培养液接种到装有15l的含糖(麦芽汁或糖蜜或麦芽汁和糖蜜的混合物)量为25％，硒（硒酸盐或亚硒酸盐）浓度为10-300μg/ml，补充适当的氮源和磷源，ph值为5的种子发酵罐中，在35℃，培养20小时。

b、制备富硒酵母：将种子培养液利用喷雾的形式按3%的比例接种到配置好的高硒饲料中，搅拌均匀，在32℃，不断搅拌，培养16小时后，用90℃的热风进行干燥，最后用常规方法进行粉碎筛分，过100目筛的物料再经检测硒含量为1800ppm，即制得包被益生菌。6、按照重量份（kg）来配置颗粒饲料，每100kg颗粒饲料包括以下重量份的原料：60kg高硒牧草（蛋白桑20kg、紫花苜蓿20kg、构树20kg），40kg高硒饲料。其中，所述颗粒饲料的制备方法，包括以下步骤：s1、按重量份来称取颗粒饲料的相关原料，将蛋白桑、构树、紫花苜蓿切段成小于1cm的斜段，得到混合料，然后放入发酵罐中，往发酵罐中加入相当于混合料重量1倍的水，加入厌氧发酵菌剂，搅拌均匀后将发酵罐密封，并于30～33℃下发酵5天，发酵完毕将发酵罐内物料平铺放置通风，通风至含水量≤20%，粉碎，过50目筛，得到发酵料粉；s2、将大豆豆秸，组配好的高硒中草药、高硒酵母饲料，粉碎成粒径小于0.3cm的细粉，和步骤s1所得的发酵料粉一起混合均匀，混合均匀后干燥至含水量为15-20%，得到混合物料；s3、将混合物料送入平模制粒机，采用平模和压辊压制成型，得到密度为1.5～1.8g/cm3的颗粒状物质，即为颗粒饲料；7、富硒颗粒饲料的饲喂方法，分三个阶段：第一阶段，母羊怀孕四个月后开始喂富硒颗粒饲料，至产羊后一个月内，每天喂1公斤富硒颗粒饲料。

第二阶段，产羊1-3个月，每天喂1.5公斤富硒颗粒饲料；第三阶段，产羊3个月至断奶，每天喂1公斤富硒颗粒饲料。实施例2、富硒羊奶中硒含量的检测分别称取0.5ml实施例1获得的富硒羊奶和其他样品（各0.5ml或0.5g）于聚四氟乙烯消化罐中，加入5ml65%的hno3溶液和1ml30%的h2o2溶液，拧紧外盖放入微波消化仪，微波消解程序为：0.5mpa、0.5min；0.8mpa、0.5min；1.0mpa、1min；1.5mpa、1min；2mpa、1min；使用石墨炉原子吸收测定样品中的总硒量。硒的吸收峰面积（a）与硒质量浓度（ρ）在0～50μg/l范围内呈线性关系，线性方程为y=0.0019x＋0.027（r=0.9957），检出限为0.59μg/l。石墨炉原子吸收光谱仪工作条件：波长为196nm，硒的灯电流为13.5ma，狭缝的宽度为1.3nm，氘灯校正，保护气为氩气，设置氩气的流速为2.8l/min。干燥温度为250℃，灰化温度与原子化温度分别为800℃与2300℃，获得样品中硒含量的标准曲线（见图1）。同时采用凯氏定氮法对样品中蛋白进行3次测定，如表1所示。表1样品中总硒量和总蛋白量实施例3、富硒羊奶的蛋白特征肽的确认为了验证实际样品中是否存在理论上所确定的肽段，本发明将羊奶样品进行前处理，酶解后直接加入甲酸终止反应，样品溶液通过高分辨质谱(qexactive)进行dd-ms模式全扫描，经proteomediscoverer2.1软件及uniprot蛋白质组学数据库()分析比对，确定样品中存在的肽段。

根据肽段筛选原则，选择含6个以上及20个以下氨基酸个数的肽段。氨基酸组成个数越多，肽段序列越长，肽段雷同的可能性越小，其特异性越强。通过数据分析和比对，本实验选择khkmehvss作为候选肽段（见图2）。实施例4、检测系统的确立1、准确称取均匀待测奶类样品10g（或10μl）至50ml离心管中，加入10ml去离子水，涡旋至奶粉或者奶液与水充分溶解。于12000rpm，4℃条件下离心10min。收集上清液于新的2ml离心管中。准确吸取100μl试样溶液，加入1.4ml碳酸氢钠(100mmol/l)溶液涡旋混匀后，再加入20μldtt溶液(500mmol/l)，在70℃水浴锅中反应30min。待冷却后加入60μl的100mmiaa溶液，在暗处室温静置30min，再加入30μl200μg/ml的碱性胰蛋白酶，在37℃水浴锅中反应2h。最后加入5μl甲酸溶液终止反应，用0.22μm微孔滤膜过滤，待测。2、取特征肽溶液(10μg/ml)50μl，加入15μl同位素甲醛溶液(4％)和15μl氰基硼氢化钠溶液(0.6mol/l)，涡旋震荡5-30s，充分混匀后室温静置，充分静止后加入1ml氨水(1％)和50μl甲酸终止反应，室温放置1h，得到内标肽溶液。

3、将预处理后的待测样品溶液放置1h后，准确移取5ml溶液，加入50μl内标肽溶液混匀，得到待萃取样品溶液。4、液质联用分析（1）进行液质联用分析：其中液相色谱分离条件为：硅烷基c18柱，柱长100mm，柱内径2.1mm；填料粒径1.7μm，孔径300å，柱温25℃；进样体积：10μl；样品温度：15℃；流动相：0.1%七氟丁酸，含甲醇0.3%和2%(v/v)，流速1ml/min。质谱的条件为：电喷雾离子源电离模式：esi+，毛细管电压：3.5kv，锥孔电压：35kv，脱溶剂温度：500℃，脱溶剂气流量：900l/min，锥孔反吹气流量：30l/hr，碰撞室压力：3.0×10-3mbar；低端分辨率1：2.55v，高端分辨率1：15.1v，离子能量1：0.3；低端分辨率2：2.75v，高端分辨率2：15.2v，离子能量2：0.8；离子源温度：150℃，提取器电压：3.0v，入口透镜电压：0.5v，出口电压：0.5v，碰撞梯度：2.0。全扫描质量数区间200-2000m/z，停留时间100ms。其中，富硒αs2-酪蛋白中特征肽标准品和同位素特征肽的质谱参数为如表2所示，表2富硒αs2-酪蛋白中特征肽标准品和同位素特征肽的质谱参数（2）根据检测结果，计算待测样品中所述硒蛋白特征肽与其相对应的内标肽的峰面积比；（3）标准曲线的建立准确吸取富硒羊奶αs2-酪蛋白特征肽溶液(1μg/ml)10μl、25μl、50μl、75μl、100μl，并加入50μl内标特征肽溶液(1μg/ml)，再分别加入0.1％的甲酸水溶液940μl、925μl、900μl、875μl、850μl涡旋混匀。

所得溶液按上述的液相色谱和质谱条件进行检测分析，每个样品平行检测6次，所得结果制作标准曲线如图3所示，标准曲线公式：y＝0.6281x+0.002891，r2＝0.998，其中y为富硒αs2-酪蛋白标签肽的浓度(ng/ml)，x为样品峰面积与内标肽峰面积的比值。（4）回收率与精密度方法准确性主要通过三个浓度水平加标实验来评估，每个加标水平实验平行六次，加标水平及回收率结果，如表4所示。精密度则通过日间、日内(连续重复三天)rsd来表示，结果显示日内rsd均小于3.0％；日间rsd均小于2.1％（表3）。表3准确度及精密度结果通过上述试验可以证实，本发明的方法回收率较高，精密度高，稳定性好，易操作，样品检测效率高，可以广泛的应用在样品的检测中。实施例5、样品的检测选取实施例2中的富硒山羊奶和其他样品作为研究对象，进行乳及乳制品中富硒羊奶αs2-酪蛋白含量的测定（1）准确称取均匀待测奶类样品10g（或10μl）至50ml离心管中，加入10ml去离子水，涡旋至奶粉或者奶液与水充分溶解。于12000rpm，4℃条件下离心10min。收集上清液于新的2ml离心管中。准确吸取100μl试样溶液，加入1.4ml碳酸氢钠(100mmol/l)溶液涡旋混匀后，再加入20μldtt溶液(500mmol/l)，在70℃水浴锅中反应30min。

待冷却后加入60μl的100mmiaa溶液，在暗处室温静置30min，再加入30μl200μg/ml的碱性胰蛋白酶，在37℃水浴锅中反应2h。最后加入5μl甲酸溶液终止反应，用0.22μm微孔滤膜过滤，待测。（2）取特征肽溶液(10μg/ml)50μl，加入15μl同位素甲醛溶液(4％)和15μl氰基硼氢化钠溶液(0.6mol/l)，涡旋震荡5-30s，充分混匀后室温静置，充分静止后加入1ml氨水(1％)和50μl甲酸终止反应，室温放置1h，得到内标肽溶液。（3）将预处理后的待测样品溶液放置1h后，准确移取5ml溶液，加入50μl内标肽溶液混匀，得到待萃取样品溶液。（4）采用实施例4的参数进行液质联用分析，检测结果，如表4所示。其中，富硒αs2-酪蛋白的含量计算公式为：a=c*n*v1*m1/m2*v2,其中，a为待检测的样品中富硒αs2-酪蛋白的含量，单位为mg/l；n为待检测的样品中富硒αs2-酪蛋白特征肽的浓度；m1为富硒αs2-酪蛋白分子量：26.5kd，m2为富硒αs2-酪蛋白特征肽的分子量：1152d，v1为复溶体积，单位为ml；v2为试样取样体积，单位为ml；c为样品稀释倍数。

表4不同奶制品中富硒αs2-酪蛋白的含量样品类型富硒αs2-酪蛋白含量（mg/100ml样品）实施例1山羊奶247牛奶124绵羊奶157完*山羊奶151美*山羊奶139飞*山羊奶158儿童配方液体奶1号102儿童配方液体奶2号99从上述数据可以看出，目前羊奶市场，尤其是保健羊奶市场中羊奶掺假现象严重，多数掺入或直接使用牛奶或者其他的劣质蛋白源代替富硒羊奶，另外还有部分利用蛋白类似物掺入进行羊奶的掺假。最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。序列表北京瀚梅生物科技有限公司一种高营养富硒羊奶制备方法及其蛋白特征肽的表征应用1siposequencelisting1.019prt人工序列(artificialsequence)1lyshislysmetgluhisvalserser15当前第1页12

技术特征：

1.一种富硒羊奶的蛋白特征肽，其特征在于所述的特征肽选自：khkmehvss。

2.根据权利要求根据权利要求1所述的一种富硒羊奶的蛋白特征肽的应用，其特征在于：液质联用检测样品中的硒含量和羊奶含量，其中所述的特征肽选自：khkmehvss。

3.如权利要求2所述的应用，所述应用包括如下步骤：

第一步，利用石墨炉原子吸收法测定奶类样品中的总硒含量；

第二步，利用特征肽确定奶类样品中的羊奶含量；

第三步，获得产品分析结果。

4.如权利要求3所述的应用，其中具体步骤为：

第一步为：精确称取样品于聚四氟乙烯消化罐中，加入hno3溶液和h2o2溶液，拧紧外盖放入微波消化仪，进行微波消解，使用石墨炉原子吸收绘制标准曲线，测定样品中的总硒量；

第二步包括如下步骤：

步骤一：将奶类样品采用胰蛋白酶酶解处理：准确称取均匀待测样品至离心管中，加入去离子水，涡旋震荡，离心后收集上清液；

准确吸取试样溶液，加入内标溶液，加入碳酸氢钠溶液涡旋混匀后，再加入dtt溶液在70℃水浴锅中反应；

待冷却后加入iaa溶液静置后再加入碱性胰蛋白酶在37℃水浴锅中反应；

最后加入甲酸溶液终止反应，用0.22μm微孔滤膜过滤，待测；

步骤二：进行液质联用分析；

步骤三：根据检测结果，计算待测样品中所述硒蛋白特征肽与其相对应的内标肽的峰面积比；

步骤四：将所述峰面积比代入标准曲线中，计算得到待测样品中硒蛋白特征肽的浓度，最后计算得到样品中富硒αs2-酪蛋白的含量。

5.如权利要求4所述的应用，其中的其中液质联用分析参数为：

液相色谱分离条件为：硅烷基c18柱，柱长100mm，柱内径2.1mm；填料粒径1.7μm，孔径300å，柱温25℃；进样体积：10μl；样品温度：15℃；流动相：0.1%七氟丁酸，含甲醇0.3%和2%(v/v)，流速1ml/min；

质谱的条件为：电喷雾离子源电离模式：esi+，毛细管电压：3.5kv，锥孔电压：35kv，脱溶剂温度：500℃，脱溶剂气流量：900l/min，锥孔反吹气流量：30l/hr，碰撞室压力：3.0×10-3mbar；低端分辨率1：2.55v，高端分辨率1：15.1v，离子能量1：0.3；低端分辨率2：2.75v，高端分辨率2：15.2v，离子能量2：0.8；离子源温度：150℃，提取器电压：3.0v，入口透镜电压：0.5v，出口电压：0.5v，碰撞梯度：2.0；

全扫描质量数区间200-2000m/z，停留时间100ms。

6.一种富硒羊奶的生产方法，所述方法具体为：

1）配置富硒叶面肥，按照硒含量的2%海藻硒多糖7份、磷酸二氢钾3份、硫酸亚铁1份、甘氨酸锰络合物0.2份，蒸馏水定容至100份重量，配置备用；

2）在富硒地区划片种植蛋白桑、构树、紫花苜蓿等低杆牧草；在低杆牧草生长过程中，每隔七天喷洒一次上述配置的富硒叶面肥，每亩每次喷施1000-2000ml，稀释30倍进行喷施，使低杆牧草含硒量达到5000μg/kg；

3）收割富硒低杆牧草，把构树、紫花苜蓿、蛋白桑晾干储存待用；

4）按照重量份（kg）1：1：1的比例来配置高硒牧草，其中高硒牧草包括以下原料：蛋白桑、紫花苜蓿、构树；

5）按照重量份（kg）来配置高硒饲料，每40kg高硒饲料包括以下重量份的原料：硒含量2%粉末海藻硒多糖2份，玉米14份，豆粕6份，麦麸12份，脂肪粉2份，高蛋乳清粉1.2份，包被益生菌0.02份，酵母培养物1.4份，脂肪酸钙0.3份，氧化镁0.06份，苏打0.3份，葡萄糖0.2份，食盐0.22份，复合维生素0.3份；

其中，所述的包被益生菌，具体操作为：

1、种子培养：选择市场上常规的商业化富硒酵母，将富硒酵母菌种培养液接种到装有15l的含糖(麦芽汁或糖蜜或麦芽汁和糖蜜的混合物)量为25％，硒（硒酸盐或亚硒酸盐）浓度为10-300μg/ml，补充适当的氮源和磷源，ph值为5的种子发酵罐中，在35℃，培养20小时；

2、制备富硒酵母：将种子培养液利用喷雾的形式按3%的比例接种到配置好的高硒饲料中，搅拌均匀，在32℃，不断搅拌，培养16小时后，用90℃的热风进行干燥，最后用常规方法进行粉碎筛分，过100目筛的物料再经检测硒含量为1800ppm，即制得包被益生菌；

6）按照重量份（kg）来配置颗粒饲料，每100kg颗粒饲料包括以下重量份的原料：60kg高硒牧草（蛋白桑20kg、紫花苜蓿20kg、构树20kg），40kg高硒饲料；

其中，所述颗粒饲料的制备方法，包括以下步骤：

s1、按重量份来称取颗粒饲料的相关原料，将蛋白桑、构树、紫花苜蓿切段成小于1cm的斜段，得到混合料，然后放入发酵罐中，往发酵罐中加入相当于混合料重量1倍的水，加入厌氧发酵菌剂，搅拌均匀后将发酵罐密封，并于30～33℃下发酵5天，发酵完毕将发酵罐内物料平铺放置通风，通风至含水量≤20%，粉碎，过50目筛，得到发酵料粉；

s2、将大豆豆秸，组配好的高硒中草药、高硒酵母饲料，粉碎成粒径小于0.3cm的细粉，和步骤s1所得的发酵料粉一起混合均匀，混合均匀后干燥至含水量为15-20%，得到混合物料；

s3、将混合物料送入平模制粒机，采用平模和压辊压制成型，得到密度为1.5～1.8g/cm3的颗粒状物质，即为颗粒饲料；

7）富硒颗粒饲料的饲喂方法，分三个阶段：第一阶段，母羊怀孕四个月后开始喂富硒颗粒饲料，至产羊后一个月内，每天喂1公斤富硒颗粒饲料；第二阶段，产羊1-3个月，每天喂1.5公斤富硒颗粒饲料；第三阶段，产羊3个月至断奶，每天喂1公斤富硒颗粒饲料。

7.利用权利要求6中的方法所制备获得的富硒羊奶在液质联用检测样品中的硒含量和羊奶含量中的应用，其中所述的富硒羊奶作为阳性对照。

技术总结

本发明涉及食品生物检测技术领域，尤其涉及一种高营养富硒羊奶制备方法及其蛋白特征肽的表征应用，本发明提供了一种富硒羊奶的制备方法，通过该方法获得的富硒羊奶蛋白含量高、硒含量充足，可以作为产品质量检测中的阳性标准品，同时提供一种标准特征肽KHKMEHVSS，实现了αs2‑酪蛋白的定量检测，确定样品中的羊奶含量，该方法具有较好的线性、灵敏度、回收率和精密度。

技术研发人员：何书海;范沙小

受保护的技术使用者：北京瀚梅生物科技有限公司

技术研发日：2020.12.11

技术公布日：2021.04.02