富氢大米含硒吗（大米含硒有什么好处）

本发明专利技术涉及富硒大米中硒形态分析的检测方法，尤其是涉及一种富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒的检测方法，所述测定方法包括下列步骤：（1）样品的制备：将待检测的富硒大米粉，密封储存备用；①有机硒的提取：采用透析法；②蛋白硒的提取；③多糖硒的提取；④RNA硒的提取；（2）硒含量的测定，采用氢化物原子荧光法测定，测定条件为：负高压：340V；灯电流：100mA；原子化温度：800℃；炉高：8mm；载气流速500mL/min；屏蔽气流速：1000mL/min；延迟时间：1s；读数时间：10s；加液时间：8s；进样体积：2mL；（3）数据处理。本发明专利技术的检测方法具有灵敏度高、准确性好，操作简单的优点。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及富硒大米中硒形态分析的检测方法，尤其是涉及一种富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒的检测方法。

技术介绍

硒是人体生命活动中必需的微量元素之一，近年来受到人们的广泛关注。它具有使人体抗衰老、预防癌变、保护与修复营养细胞、解毒排毒、提高免疫力等多种生理功能，被称为主宰生命的元素之一。硒对人体的重要性已十分明确，但权威资料表明硒的功能随其形态不同而异，食物中无机硒的存在对人体是有害的，无机形态的硒特别是六价硒毒性很大，对人体毫无营养可言，只有有机形态的硒，如硒蛋白、硒代氨基酸、硒多肽、硒多糖等，在机体内才能转变为生理活性物质，为人体所吸收利用。目前，国 内外有关富硒农产品与食品的研究并不多见，对有益硒形态的检测与分析更是涉及甚少，因此开展对富硒农产品中有益硒形态分析技术研究十分必要，帮助人们合理明智的选择健康的富硒产品，科学膳食，具有重要的现实意义。

技术实现思路

本专利技术的目的在于解决富硒农产品中硒形态分析检测的难题，提供一种富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒的检测方法，本专利技术的检测方法具有灵敏度高、准确性好，操作简单的优点。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是:富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法,所述测定方法包括下列步骤: (I)样品的制备:将待检测的富硒大米粉碎获得粒度为100目的富硒大米干粉，密封储存备用； ①有机硒的提取:称取上述富硒大米干粉1.00g，加入5 10ml超纯水，进一步研磨使富硒大米干粉充分破裂，定量转移至透析袋中，用超纯水透析24h，将透析后的样品取出，于12000rpm条件下离心15min获得沉淀,所述沉淀真空干燥得有机硒n^g ； ②蛋白硒的提取:称取上述富硒大米干粉10.0Og,于500ml三角瓶中，加入0.05mol/LNaOH溶液IOOml振荡2h得混合液，将混合液于12000rpm条件下离心15min，取上清液，加入0.lmol/LHCl调节pH至5.5,再次于12000rpm条件下离心15min得沉淀,将所述沉淀真空干燥得蛋白硒m2g ； ③多糖硒的提取:称取上述富硒大米干粉2.00g，加入IOOml 0.5mol/LNa0H溶液，于80°C水浴加热2h提取多糖，然后于12000rpm条件下离心15min，取上清液用氯仿-正丁醇溶液洗涤3次，以除去粗多糖的游离蛋白，所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1，然后加入无水乙醇至溶液最终乙醇浓度为80%，静置24h，收集沉淀，将所述沉淀真空干燥得多糖硒m3g ;④RNA硒的提取:称取上述富硒大米干粉10.0Og,加入200ml 0.025mol/LNa0H溶液摇振荡45min,然后用3mol/L盐酸调pH至7.0,搅拌IOmin后加热至90°C,保温IOmin后冷却至10°C，于12000rpm离心15min，取上清液用6mol/L盐酸调pH至2.5，5°C冷藏静置过夜，再次于12000rpm离心15min，收集沉淀加入f 2滴氨水，用30ml蒸馏水溶解，用氯仿-正丁醇溶液洗涤3次，所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1，将得到的水相烘干获得RNA硒m4g ； (2)硒含量的测定 ①标准曲线:按0、4、8、12、16、20μ g/L的浓度梯度绘制标准曲线； ②消化液制备:分别称取上述有机硒、蛋白硒、多糖硒和RNA硒0.3g于50ml三角瓶中，加IOml由HNO3和HClO4按体积比4:1混合制得混合酸，冷消化过夜，次日加热消化，当溶液变为清亮无色并伴有白烟出现时，再继续加热至剩余体积2ml左右,冷却,再加5ml 6mol/L盐酸，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，冷却，转移定容至50ml，获得消化液； ③测定:分别取上述消化液各2ml于IOml比色管中，加入浓盐酸2ml，加水定容至10ml，混匀后采用氢化物原子荧光法测定，依次获得峰面积荧光值X1、X2、X3、X4，将峰面积荧光值X1、X2、X3、X4分别带入标准曲线获得有机硒、蛋白硒、多糖硒和RNA硒消化液硒浓度为 Y1J2J3J4 ； (3)数据处理 ①富硒大米中有机硒含量=Yf0.25 + 0.3* Hi1+富硒大米质量，其中富硒大米质量为1.0Og ； ②富硒大米中蛋白硒含量=Y2*0.25 + 0.3* m2+富硒大米质量，其中富硒大米质量为10.0Og ； ③富硒大米中有机硒含量=Υ3*0.25 + 0.3* m3+富硒大米质量，其中富硒大米质量为2.0Og ； ④富硒大米中有机硒含量=Υ4*0.25 + 0.3* m4+富硒大米质量，其中富硒大米质量为10.0Og0作为优选，有机硒提取采用的透析袋的规格为8000Da，透析过程中每6h离心更换一次超纯水。

作为优选，所述真空干燥的真空度为-0.085^-0.095Mpa，真空干燥的温度为50 60。。。作为优选，RNA硒提取中所用氨水的质量浓度为25 28%。作为优选，氢化物原子荧光法测定条件为:负高压:340 V ;灯电流:100 mA ;原子化温度:800°C ;炉高:8 mm ;载气流速500 mL/min ;屏蔽气流速:1 000mL/min ;延迟时间:1s ;读数时间:10 s ;加液时间:8 s ;进样体积:2 mL。本专利技术的有益效果是:本专利技术通过设计合理科学的提取工艺，将富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒和RNA硒高效的提出出来，然后通过氢化物原子荧光法测定，具有准确度高、精密度好、回收率高的优点，同时本专利技术测定方法采用的试剂和设备均系常规试剂和设备，检测成本低，方便实施。附图说明图1是本专利技术的硒标准曲线图。具体实施例方式下面通过具体实施例，并结合附图，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。材料:富硒大米采自浙江省衢州市龙游县志棠富硒地带； 试剂:硝酸、盐酸、高氯酸均为优级纯，氢氧化钠、无水乙醇、氯仿、正丁醇、氨水、硼氢化钠为分析纯，硒标准溶液参照GB5009.93-2010配置； 仪器及设备:双道原子荧光光度计(AFS-930)，电热板(DB-2A)，研钵，粉碎机，离心机，控温摇床、超纯水仪(AD-SR20)。

氢化物原子荧光法测定条件为:负高压:340 V ;灯电流:100 mA ;原子化温度:800°C ;炉高:8 mm ;载气流速500 mL/min ;屏蔽气流速:1 000mL/min ;延迟时间:1 s ;读数时间:10 s ;加液时间:8 s ;进样体积:2 mL。实施例: 富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法,所述测定方法包括下列步骤: (1)样品的制备:将待检测的富硒大米粉碎获得粒度为100目的富硒大米干粉，密封储存备用； ①有机硒的提取:称取上述富硒大米干粉1.0Og,加入IOml超纯水,进一步研磨使富硒大米干粉充分破裂，定量转移至透析袋中，透析袋的规格为8000Da，用超纯水透析24h，期间每6h离心更换超纯水一次，将透析后的样品取出，于12000rpm条件下离心15min获得沉淀，所述沉淀在真空度为-0.085Mpa、温度为60°C的条件下干燥得有机硒mlg ； ②蛋白硒的提取:称取上述富硒大米干粉10.0Og,于500ml三角瓶中，加入0.05mol/LNaOH

【技术保护点】

富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法，其特征在于，所述测定方法包括下列步骤：（1）样品的制备：将待检测的富硒大米粉碎获得粒度为100目的富硒大米干粉，密封储存备用；①有机硒的提取：称取上述富硒大米干粉1.00g，加入5~10ml超纯水，进一步研磨使富硒大米干粉充分破裂，定量转移至透析袋中，用超纯水透析24h，将透析后的样品取出，于12000rpm条件下离心15min获得沉淀，所述沉淀真空干燥得有机硒m1g；??????②蛋白硒的提取：称取上述富硒大米干粉10.00g，于500ml三角瓶中，加入0.05mol/LNaOH溶液100ml振荡2h得混合液，将混合液于12000rpm条件下离心15min，取上清液，加入0.1mol/LHCl调节pH至5.5，再次于12000rpm条件下离心15min得沉淀，将所述沉淀真空干燥得蛋白硒m2g；③多糖硒的提取：称取上述富硒大米干粉2.00g，加入100ml?0.5mol/LNaOH溶液，于80℃水浴加热2h提取多糖，然后于12000rpm条件下离心15min，取上清液用氯仿?正丁醇溶液洗涤3次，所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1，然后加入无水乙醇至溶液最终乙醇浓度为80%，静置24h，收集沉淀，将所述沉淀真空干燥得多糖硒m3g；④RNA硒的提取：称取上述富硒大米干粉10.00g，加入200ml?0.025mol/LNaOH溶液摇振荡45min，然后用3mol/L盐酸调pH至7.0，搅拌10min后加热至90℃，保温10min后冷却至10℃，于12000rpm离心15min，取上清液用6mol/L盐酸调pH至2.5，5℃冷藏静置过夜，再次于12000rpm离心15min，收集沉淀加入1~2滴氨水，用30ml蒸馏水溶解，用氯仿?正丁醇溶液洗涤3次，所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1，将得到的水相烘干获得RNA硒m4g；（2）硒含量的测定①标准曲线：按0、4、8、12、16、20?μg/L的浓度梯度绘制标准曲线；②消化液制备：分别称取上述提取获得的有机硒、蛋白硒、多糖硒和RNA硒0.3g于50ml三角瓶中，加10ml由HNO3和HClO4按体积比4：1混合制得混合酸，冷消化过夜，次日加热消化，当溶液变为清亮无色并伴有白烟出现时，再继续加热至剩余体积2ml左右，冷却，再加5ml?6mol/L盐酸，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，冷却，转移定容至50ml，获得消化液；③测定：分别取上述消化液各2ml于10ml比色管中，加入浓盐酸2ml，加水定容至10ml，混匀后采用氢化物原子荧光法测定，依次获得峰面积荧光值X1?、X2?、X3、?X4，将峰面积荧光值X1?、X2?、X3、?X4分别带入标准曲线获得有机硒、蛋白硒、多糖硒和RNA硒消化液硒浓度为Y1、Y2、Y3、Y4；（3）数据处理①富硒大米中有机硒含量=?Y1*0.25÷0.3*?m1÷富硒大米质量，其中富硒大米质量为1.00g；②富硒大米中蛋白硒含量=?Y2*0.25÷0.3*?m2÷富硒大米质量，其中富硒大米质量为10.00g；③富硒大米中多糖硒含量=?Y3*0.25÷0.3*?m3÷富硒大米质量，其中富硒大米质量为2.00g；④富硒大米中RNA硒含量=?Y4*0.25÷0.3*?m4÷富硒大米质量，其中富硒大米质量为10.00g。

【技术特征摘要】

1.富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法,其特征在于,所述测定方法包括下列步骤: (1)样品的制备:将待检测的富硒大米粉碎获得粒度为100目的富硒大米干粉，密封储存备用； ①有机硒的提取:称取上述富硒大米干粉1.00g，加入5 10ml超纯水，进一步研磨使富硒大米干粉充分破裂，定量转移至透析袋中，用超纯水透析24h，将透析后的样品取出，于12000rpm条件下离心15min获得沉淀,所述沉淀真空干燥得有机硒n^g ； ②蛋白硒的提取:称取上述富硒大米干粉10.0Og,于500ml三角瓶中，加入0.05mol/LNaOH溶液IOOml振荡2h得混合液，将混合液于12000rpm条件下离心15min，取上清液，加入0.lmol/LHCl调节pH至5.5,再次于12000rpm条件下离心15min得沉淀,将所述沉淀真空干燥得蛋白硒m2g ； ③多糖硒的提取:称取上述富硒大米干粉2.00g，加入IOOml 0.5mol/LNa0H溶液，于80°C水浴加热2h提取多糖，然后于12000rpm条件下离心15min，取上清液用氯仿-正丁醇溶液洗涤3次，所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1，然后加入无水乙醇至溶液最终乙醇浓度为80%，静置24h，收集沉淀，将所述沉淀真空干燥得多糖硒m3g ； ④RNA硒的提取:称取 上述富硒大米干粉10.0Og,加入200ml 0.025mol/LNa0H溶液摇振荡45min,然后用3mol/L盐酸调pH至7.0,搅拌IOmin后加热至90°C,保温IOmin后冷却至10°C，于12000rpm离心15min，取上清液用6mol/L盐酸调pH至2.5，5°C冷藏静置过夜，再次于12000rpm离心15min，收集沉淀加入f 2滴氨水，用30ml蒸馏水溶解，用氯仿-正丁醇溶液洗涤3次，所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1，将得到的水相烘干获得RNA硒m4g ； (2)硒含量的测定 ①标准曲线:按0、4、8、12、16、20μ g/L的浓度梯度绘制标准曲线； ②消化液制备:分别称取上述提取获得的有机砸、蛋白砸、多糖砸和RNA砸0.3g于50ml三角瓶中，加IOml由HN03和HC10…

【专利技术属性】

技术研发人员：祝华明，方建军，张旭，郑睿行，鲍利锋，龚鸿萍，方芳，夏爱萍，

申请(专利权)人：衢州市质量技术监督检测中心，

类型：发明

国别省市：

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