鸡蛋纳米补硒液（蛋白纳米硒）
本发明属于营养健康领域，特别涉及一种富硒蛋鸡饲料及其应用。
背景技术：
硒是人体内不可缺少的微量元素它是红细胞中的抗氧化剂—谷胱甘肽过氧化酶的重要成分，充足硒可促使谷胱甘肽过氧化酶有效地将人体内的氢转变为水；硒还是过氧化歧酶的成分，这种酶可以消除自由基使参与人体血压调节儿茶酚胺保持正常水平；硒还能排除体内毒素、抗氧化、有效的抑制过氧化脂质的产生，防止血凝块，清除胆固醇，促进免疫球蛋白合成，增强人体免疫功能。此外，含有硒的多种酶能够调节甲状腺工作参与氨基酸和精子尾部蛋白合成。新近的统计数据表明当人体缺硒时会导致上述机能下降，感染高致病性毒疾的危险明显增大，并且特殊病人如癌症、白内障、克山病、甲状腺肿大等患者，或是亚健康人群，每日需要补充较多的硒。因此病人和非病人群每日补硒量是有差异的，例如，普通人群硒的生理需要量最低约为40μg/d，事实上有科学家建议每人每天摄入硒的标准应为200μg/d，而对于癌症病人，对硒的摄入量会更高，约为300μg/d。
硒一般以有机硒与无机硒两种形态存在，而无机硒最主要的缺点为吸收利用率不理想，且具有毒性对人体有副作用，因此一般将有机硒作为硒源，但有机硒存在着溶解性差、不易降解等缺点。此外，现有技术在研究酵母硒和亚硒酸钠对鸡蛋含量动态变化的影响时发现，蛋鸡饲料粮中不额外添加以及添加0.30mg/kg硒的酵母硒和亚硒酸钠对生产性能和蛋品质无不良影响；相对于亚硒酸钠，酵母硒中硒向鸡蛋中的转移速度更快，效率更高。但硒酵母硒价格昂贵，不适合大范围应用。因此如何满足不同疾病、不同年龄、不同地区的人群对硒的摄取量，同时减轻硒的毒副作用是亟需解决的问题。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种富硒蛋鸡饲料。
本发明另一目的在于提供上述富硒蛋鸡饲料的应用。
本发明的再一目的在于提供一种富硒鸡蛋产品。
本发明的目的通过下述方案实现：
一种富硒蛋鸡饲料，其组成成分包括多糖纳米硒和基础鸡日粮。
所述多糖纳米硒在富硒蛋鸡饲料中的含量优选为按硒量为0.05～1mg/kg计算；进一步优选为按硒量为0.1～0.5mg/kg计算；更优选为按硒量为0.15～0.45mg/kg计算；最优选为按硒量为0.345mg/kg计算。
所述多糖纳米硒优选为香菇多糖纳米硒(let-senps)、羧甲基茯苓多糖纳米硒(cmp-senps)和壳聚糖纳米硒(cs-senps)中的一种或至少两种；更优选为羧甲基茯苓多糖纳米硒。
所述的多糖纳米硒优选通过如下步骤制备得到：将用于修饰纳米硒的多糖和纳米硒溶液混合反应后纯化，得到多糖纳米硒。
所述的纳米硒是通过氧化还原法制备得到的纳米硒，优选为通过如下步骤制备得到：将无机硒和还原剂混合后反应，得到纳米硒。
所述的无机硒优选为亚硒酸、亚硒酸盐和二氧化硒中的一种或至少两种。
所述的亚硒酸盐为亚硒酸钠(na2seo3)、亚硒酸钾(k2seo3)和亚硒酸锌(znseo3)中的一种或至少两种。
所述的还原剂优选为维生素c(vc)、硼氢化钠、巯基乙醇、还原型谷胱甘肽、葡萄糖和五水硫代硫酸钠中的一种或至少两种。
所述的无机硒和还原剂的用量按还原剂过量为宜，从而能将无机硒充分还原；优选为按摩尔比1：1～6配比计算；更优选为按摩尔比1：4配比计算。
所述的混合的方式优选为：将无机硒的水溶液和还原剂的水溶液混合。
所述的无机硒的水溶液中无机硒的浓度优选为5～50mm；更优选为30～35mm。
所述的还原剂为维生素c时，其水溶液中维生素c的浓度优选为20～200mm；更优选为120～140mm。
所述的反应的条件优选为在转速为70～90rpm和30～50℃下反应8～12h。
上述多糖纳米硒的制备方法中，所述的纳米硒的溶液浓度优选为5～50mm；更优选为30～35mm。
上述多糖纳米硒的制备方法中，所述的用于修饰纳米硒的多糖优选为香菇多糖、羧甲基茯苓多糖和壳聚糖中的一种或至少两种。
上述多糖纳米硒的制备方法中，所述的用于修饰纳米硒的多糖的浓度优选为5～25g/l；更优选为20～21g/l。
上述多糖纳米硒的制备方法中，所述的反应的条件优选为在转速为50～100rpm和15～70℃下反应4～12h
上述多糖纳米硒的制备方法中，所述的反应的条件更优选为在转速为70rpm和50℃下反应8h。
上述多糖纳米硒的制备方法中，所述的纯化的方式优选为使用5～100kd的超滤膜过滤，优选地，所述的纯化为纯化至透过液电导率达到0.025s/m以下。
所述基础鸡日粮优选为玉米-大豆粕为主的基础日粮，按质量份数包括：玉米40～80份、豆粕10～40份、麦麸3～9份、石粉4～10份、磷酸氢钙1～2份、沸石粉1.50～3.10份、nacl0.10～0.60份、dl-蛋氨酸0.03～0.10份、维生素矿物质预混料0.10～0.60份。
所述基础鸡日粮更优选为：玉米60份、豆粕22份、麦麸6份、石粉7.98份、磷酸氢钙1.31份、沸石粉2.09份、nacl0.30份、dl-蛋氨酸0.06份、维生素矿物质预混料0.26份。
所述维生素矿物质预混料优选为，为每千克饲粮提供：维生素a12000iu，维生素d33000iu，维生素e30iu，维生素k36mg，硫胺素b13mg，核黄素b29mg，泛酸钙0.004mg，d-泛酸18mg，烟酸b36mg，吡哆醇b66mg，维生素b120.03mg，生物素0.15mg，叶酸1.5mg，植酸酶10mg，胆碱50mg，铁72mg，铜5.12mg，锰84.8mg，锌60mg，钴0.32mg，碘0.64mg，抗氧化剂20mg。
上述富硒蛋鸡饲料在富硒鸡蛋生产中的应用，包括如下步骤：将上述富硒蛋鸡饲料喂食蛋鸡。
所述的喂食优选为连续喂食。
所述的连续喂食的时间优选为7～100天，更优选为21～91天
所述的喂食的次数优选为每天喂食2～4次，期间自由采食和自由饮水，每天光照时间为12～18h，相对湿度为50％～60％，自然通风结合纵向负压通风。
一种富硒鸡蛋产品，通过上述应用得到。
所述的富硒鸡蛋产品的含硒量优选为0.5～1.2μg/g，更优选为0.9μg/g。
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：
1、本发明的富硒饲料中硒含量低，但硒转化率高，鸡蛋富硒效果显著，当鸡饲料中let-se纳米硒、cmp-se纳米硒、cs-se纳米硒的硒量为0.345mg/kg时，硒含量较空白鸡饲料分别提高了222.9％、350.7％、235.2％。在今后的实际应用中可针对不同的对象进行富硒量的调控；
2.多糖纳米硒在鸡蛋中的富集情况优于亚硒酸钠，与富硒酵母相当，但胜在安全、生物效应好，并且更为经济；
3、当使用本发明的鸡饲料喂养蛋鸡时，蛋鸡机体抗氧化水平显著提高。明显优于亚硒酸钠与富硒酵母；
4、本发明中多糖纳米硒的水溶性好，机体毒副作用小且易被机体吸收；
5、当多糖纳米硒在富硒蛋鸡饲料中的硒量为0.15mg/kg时，料蛋比、不合格蛋率优于高浓度。
附图说明
图1为实施例4中喂食含不同硒源的饲料所得鸡蛋的生产性能图；其中，图(a)为产蛋率，图(b)为平均蛋重，图(c)为料蛋比，图(d)为不合格蛋率；图中，1为添加0.15mg/kg、2为添加0.3mg/kg、3为添加0.45mg/kg硒量的香菇多糖纳米硒作为硒源，4为添加0.3mg/kg硒量的亚硒酸钠作为硒源，5为空白组。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例中所用试剂如无特殊说明均可从市场常规购得。
实施例1
(1)将692g亚硒酸钠(天赐福生物工程有限公司)溶于20l超纯水，将2.5kg香菇多糖(陕西森弗天然制品有限公司，1kg/包50％，cas号37339-90-5)与2.81kgvc溶于100l超纯水，然后泵入反应罐中。
(2)启动反应罐，设置转速为70～90rpm，搅匀时转速为90rpm。
(3)缓慢将20l亚硒酸钠溶液加入反应罐，封闭，将转数设置为70rpm，反应8h。
(4)反应完成后，将多糖纳米硒从反应罐出料口导出，放置于干净的桶内(若有大颗粒沉淀或是反应罐杂质，需在出料管口加网过筛)。
(5)采用5kd超滤膜对香菇多糖纳米硒进行过滤，实时监测透过液电导率，当透过液电导率达到0.025s/m以下，收集多糖纳米硒溶液。
(6)超滤结束后，将7.5kg辅料乳糖加入到收集的多糖纳米硒溶液中，乳糖的浓度为质量体积比2％，通过喷雾干燥机喷干，并收集粉末样品。
用此方法制备的香菇多糖纳米硒的水合粒径都保持在120nm左右，并且稳定性及分散性良好，zeta电位值保持在-15mv附近
实施例2
(1)将692g亚硒酸钠(天赐福生物工程有限公司)溶于20l超纯水，将2.5kg壳聚糖(国药集团化学试剂有限公司，生化试剂，批号20160525，100g/瓶)与2.81kgvc溶于100l超纯水，然后泵入反应罐中。
(2)启动反应罐，设置转速为70～90rpm，搅匀时转速为90rpm。
(3)缓慢将20l亚硒酸钠溶液加入反应罐，封闭，将转数设置为70rpm，反应8h。
(4)反应完成后，将多糖纳米硒从反应罐出料口导出，放置于干净的桶内(若有大颗粒沉淀或是反应罐杂质，需在出料管口加网过筛)。
(5)采用5kd超滤膜对壳聚糖多糖纳米硒进行过滤，实时监测透过液电导率，当透过液电导率达到0.025s/m以下，收集多糖纳米硒溶液。
(6)超滤结束后，将7.5kg辅料乳糖加入到收集的多糖纳米硒溶液中，乳糖的浓度为质量体积比2％，通过喷雾干燥机喷干，并收集粉末样品。
得到纯化后的壳聚糖修饰的纳米硒水溶液，外观呈现橙色。所得壳聚糖修饰的纳米硒粒度均在100～200nm之间，分散均匀，zeta电位为40mv。
实施例3
(1)将692g亚硒酸钠(天赐福生物工程有限公司)溶于20l超纯水，将2.5kg羧甲基茯苓多糖(湖南补天药业有限公司，100g/瓶)与2.81kgvc溶于100l超纯水，然后泵入反应罐中。
(2)启动反应罐，设置转速为70～90rpm，搅匀时转速为90rpm。
(3)缓慢将20l亚硒酸钠溶液加入反应罐，封闭，将转数设置为70rpm，反应8h。
(4)反应完成后，将多糖纳米硒从反应罐出料口导出，放置于干净的桶内(若有大颗粒沉淀或是反应罐杂质，需在出料管口加网过筛)。
(5)采用5kd超滤膜对羧甲基茯苓多糖纳米硒进行过滤，实时监测透过液电导率，当透过液电导率达到0.025s/m以下，收集多糖纳米硒溶液。
(6)超滤结束后，将7.5kg辅料乳糖加入到收集的多糖纳米硒溶液中，乳糖的浓度为质量体积比2％，通过喷雾干燥机喷干，并收集粉末样品。
所得羧甲基茯苓多糖修饰的纳米硒粒度在85～100nm之间，zeta电位为-22mv。
实施例4
将基础鸡日粮分别和3组不同量的香菇多糖纳米硒混合作为试验组，其中香菇多糖纳米硒的含量满足所提供的硒量分别为0.15、0.3、0.45mg/kg(香菇多糖的硒含量通过原子荧光法进行测定)；将亚硒酸钠和基础鸡日粮混合作为对照组，亚硒酸钠的用量满足所提供的硒量为0.3mg/kg；基础鸡日粮做为空白组。其中各组鸡饲料中基础鸡日粮按质量份数包括以下组分：玉米60份、豆粕22份、麦麸6份、石粉7.98份、磷酸氢钙1.31份、沸石粉2.09份、nacl0.30份、dl-蛋氨酸0.06份、维生素矿物质预混料0.26份。
鸡蛋的生产：挑选开产日龄相同、体重相近的21周龄健康海兰灰蛋鸡，随机分为5组，每组7个重复，每个重复10只鸡，分别喂食上述饲料。按蛋鸡场正常饲养程序进行饲养，具体为：半开放式鸡舍笼三层层叠式笼养，每笼2-3只鸡，自然光照加人工补光，每天光照时间为16h，相对湿度50％～60％，自然通风结合纵向负压通风。饲料为干粉料，每天早晚喂料2次(早7：00～8：00；晚16：00～17：00)，自由采食和饮水，每天上午和下午定时捡蛋2次，每周带鸡消毒1次，每天清粪2次。常规防疫和免疫，其他管理措施按照鸡场常规管理进行。试验周期：7天预试期和12周试验期(预试期期间，各组统一饲喂基础日粮，预试期结束时统计各组生产性能，经分析无显著差异开始正式试验)。
图1为实施例4中喂食含不同硒源的饲料所得鸡蛋的生产性能图。由图可知，当所添加的香菇多糖纳米硒的硒量为0.15mg/kg时，蛋料比明显高于0.3和0.45mg/kg，而不合格蛋率要明显低于0.3和0.45mg/kg。其中不合格蛋为畸形蛋、沙皮蛋、波形皱纹蛋、过大蛋、双黄蛋、圆形蛋、过小蛋、气室过大蛋(照蛋是可见气室比正常蛋明显增大，部分蛋壳有曲线、交叉线或放射状裂纹，多数来源于薄蛋壳、外壳粗糙蛋和沙壳蛋中的裂纹)。
实施例5
一种富硒蛋鸡饲料，包括香菇多糖纳米硒和基础鸡日粮，其中香菇多糖纳米硒的用量满足所提供的硒量为0.345mg/kg，基础鸡日粮按质量份数包括以下组分：玉米60份、豆粕22份、麦麸6份、石粉7.98份、磷酸氢钙1.31份、沸石粉2.09份、nacl0.30份、dl-蛋氨酸0.06份、维生素矿物质预混料0.26份。
富硒鸡蛋的生产：将5组(44只/组)开产日龄相同、体重相近的269日龄健康海兰灰蛋鸡，按蛋鸡场正常饲养程序进行饲养，具体为：半开放式鸡舍笼三层层叠式笼养，每笼2-3只鸡，自然光照加人工补光，每天光照时间为16h，相对湿度50％～60％，自然通风结合纵向负压通风。饲料为干粉料，每天早晚喂料2次(早7：00～8：00；晚16：00～17：00)，自由采食和饮水，每天上午和下午定时捡蛋2次，每周带鸡消毒1次，每天清粪2次。常规防疫和免疫，其他管理措施按照鸡场常规管理进行。试验周期：7天预试期和12周试验期。
实施例6
一种富硒蛋鸡饲料，包括羧甲基茯苓多糖纳米硒和基础鸡日粮，其中香菇多糖纳米硒的用量满足所提供的硒量为0.345mg/kg，基础鸡日粮按质量份数包括以下组分：玉米60份、豆粕22份、麦麸6份、石粉7.98份、磷酸氢钙1.31份、沸石粉2.09份、nacl0.30份、dl-蛋氨酸0.06份、维生素矿物质预混料0.26份。
富硒鸡蛋的生产：将5组(44只/组)开产日龄相同、体重相近的269日龄健康海兰灰蛋鸡，按蛋鸡场正常饲养程序进行饲养，具体为：半开放式鸡舍笼三层层叠式笼养，每笼2-3只鸡，自然光照加人工补光，每天光照时间为16h，相对湿度50％～60％，自然通风结合纵向负压通风。饲料为干粉料，每天早晚喂料2次(早7：00～8：00；晚16：00～17：00)，自由采食和饮水，每天上午和下午定时捡蛋2次，每周带鸡消毒1次，每天清粪2次。常规防疫和免疫，其他管理措施按照鸡场常规管理进行。试验周期：7天预试期和12周试验期。
实施例7
一种富硒蛋鸡饲料，包括壳聚糖纳米硒和基础鸡日粮，其中香菇多糖纳米硒的用量满足所提供的硒量为0.345mg/kg，基础鸡日粮按质量份数包括以下组分：玉米60份、豆粕22份、麦麸6份、石粉7.98份、磷酸氢钙1.31份、沸石粉2.09份、nacl0.30份、dl-蛋氨酸0.06份、维生素矿物质预混料0.26份。
富硒鸡蛋的生产：将5组(44只/组)开产日龄相同、体重相近的269日龄健康海兰灰蛋鸡，按蛋鸡场正常饲养程序进行饲养，具体为：半开放式鸡舍笼三层层叠式笼养，每笼2-3只鸡，自然光照加人工补光，每天光照时间为16h，相对湿度50％～60％，自然通风结合纵向负压通风。饲料为干粉料，每天早晚喂料2次(早7：00～8：00；晚16：00～17：00)，自由采食和饮水，每天上午和下午定时捡蛋2次，每周带鸡消毒1次，每天清粪2次。常规防疫和免疫，其他管理措施按照鸡场常规管理进行。试验周期：7天预试期和12周试验期。
对比例1
对比例1与实施例5～7的不同之处在于不加入硒源。
对比例2
对比例2与实施例5～7的不同之处在于加入的硒源是亚硒酸钠。
对比例3
对比例3与实施例5～7的不同之处在于加入的硒源是酵母硒。
试验期，在实施例5～7和对比例1～3中每周各选取10枚蛋(每组2枚)，采用原子荧光法测定鸡蛋中的硒含量。
表1实施例5～7和对比例1～3中鸡蛋的硒含量
由表1可知，硒在鸡蛋中的累积是波动的，而实施例5～7中三种senps达到峰值的时间大约在第五周，其中实施例5所得鸡蛋的硒含量为0.843±0.454μg/g，实施例6所得鸡蛋的硒含量为1.176±0.242μg/g，实施例7所得鸡蛋的硒含量为0.875±0.291μg/g。与配料不含硒源的对比例1(0.261±0.192μg/g)相比，鸡蛋中硒含量分别提高了222.9％、350.7％、235.2％。与对比例3中硒酵母所得鸡蛋硒含量相当，但多糖纳米硒的在安全性、生物效应较好。
试验期第84天，在实施例5～7和对比例1～3各选取6只鸡(每组2只鸡)，采取静脉血后，采用试剂盒检测谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)、超氧化物歧酶(sod)和硒蛋白p(selp)的活性。
表2实施例5～7和对比例1～3中鸡血清抗氧化能力
如表2所示，实施例5～7的抗氧化活性高于对比例2且接近于对比例3，其中实施例7的机体抗氧化活性最好，与对比例1相比，硒蛋白p的活性提高了477.8％，超氧化物歧化酶活力提高150.5％。
试验期第84天，在实施例5～7和对比例1～3各选取6只鸡(每组2只鸡)，每只鸡称取0.5g肝组织，用预冷的pbs清洗干净，然后加入5ml匀浆液(即10％)，组织研磨机(70hz)研磨2min；然后在4℃下以12000rpm的速度离心10min后，收集上清；然后使用bca蛋白浓度测定试剂盒(p0009/p0010/p0010s/p0011/p0012/p0012s)测定蛋白浓度，按照鸡硒蛋白p1elisa试剂盒(e12s0086)、总sod活性检测试剂盒(wst-8法)(s0101)、谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(s0056)说明书要求一一检测上述肝研磨液的抗氧化活性。
表3实施例5～7和对比例1～3中鸡肝组织提取液抗氧化能力
硒蛋白p能够结合gsh，具有氧化还原酶的活性；能够降低细胞对过氧化氢敏感性及毒性；具有清除ros的活性，防止细胞膜及其他大分子氧化损伤的发生。表3为实施例5～7和对比例1～3中鸡肝组织提取液抗氧化能力，从表中可以看出而本发明实施例5～7中，所得鸡蛋的硒蛋白p的浓度在第84天时分别为3.47705、5.928645和4.058775ng/ml，与对比例1相比，分别提高了21.77％、107.6％、42.14％；超氧化物歧化酶活力分别提高了30.2％、65.3％、38.5％；谷胱甘肽过氧化物酶分别提高了899.9％、945.9％、1381.6％。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
技术特征：
技术总结
本发明属于营养健康领域，公开了一种富硒蛋鸡饲料及其应用。该富硒蛋鸡饲料的组成成分包括多糖纳米硒和基础鸡日粮，其中多糖纳米硒在富硒蛋鸡饲料中的含量为按硒量0.05～1mg/kg计算。本发明的富硒饲料中硒含量低，但硒转化率高，鸡蛋富硒效果显著，当鸡饲料中香菇多糖纳米硒、羧甲基茯苓多糖纳米硒、壳聚糖纳米硒的硒量为0.345mg/kg时，所生产的鸡蛋的硒含量较空白鸡饲料分别提高了222.9％、350.7％、235.2％，在今后的实际应用中可针对不同的对象进行富硒量的调控。
技术研发人员：陈填烽;贺利贞;宋桭环;杨亚慧
受保护的技术使用者：暨南大学
技术研发日：2019.03.07
技术公布日：2019.05.28
