含硒肽的产品（肽与硒有何不同）

Vol． 37 高 等 学 校 化 学 学 报 No． 72016 年 7 月CHEMICAL JOUＲNAL OF CHINESE UNIVEＲSITIES 1302 ～1306doi:10． 7503/cjcu20160101具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含硒三肽尹居鑫 1，2 ，李祖宏 1，3 ，牟 颖 1，3 ，吕绍武 1，2 ，罗贵民 1(1． 吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室，2． 生命科学学院，长春 130012;3． 浙江大学智能系统与控制研究所，杭州 310027)摘要 合成了由硒代半胱氨酸(U)、谷氨酰胺(Q)和色氨酸(W)组成的 QUW，QWU，WQU，WUQ，UWQ 和UQW 6 个具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的含硒三肽;采用双酶偶联法进行了 GPx 活力测定和稳态动力学分析;通过噻唑蓝(MTT)比色法、划痕愈合实验和 Western blot 技术表征了含硒三肽对肝癌 HepG2 细胞生长和迁移能力的影响． 结果表明，当 U 位于氨基端时，含硒三肽的 GPx 活力高于 U 位于中间位置或者羧基端时． UWQ 催化谷胱甘肽(GSH)还原 H 2 O 2 的活力最高，其催化机制为乒乓机制． UWQ 可使 HepG2 细胞运动能力减弱，降低肝癌细胞的浸润转移能力．关键词 谷胱甘肽过氧化物酶;模拟物;含硒三肽中图分类号 O629;Q554 + ． 6 文献标志码 A收稿日期:2016-02-18． 网络出版日期:2016-06-16．基金项目:国家重大科学仪器设备开发专项(批准号:2013YQ470781)和吉林省自然科学基金(批准号:20130101159JC)资助．联系人简介:吕绍武，男，博士，副教授，主要从事模拟酶方面的研究． E-mail:lvsw@ jlu． edu． cn谷胱甘肽过氧化物酶(GPx，EC． 1． 11． 1． 9)是生物体内最重要的抗氧化酶之一 ［1，2］ ，结构解析结果Fig． 1 Catalytic triad of GPx(PDB data:1gp1)［3］表明，硒代半胱氨酸(Sec，U)、谷氨酰胺(Gln，Q)和色氨酸(Trp，W)组成了天然 GPx 的催化三联体(图 1)［3］ ，但未阐明催化三联体中各氨基酸的催化贡献规律． GPx 能发挥维持体内活性氧(ＲOS)平衡的重要作用，对预防和治疗癌症、心血管病等多种疾病效果明显［4］ ． 但作为天然 GPx 催化中心的 U由终止密码子 UGA 编码，难以采用基因工程方法量产，限制了其深入研究和应用，因此 GPx 模拟物的研究成为该领域的热点之一 ［5］ ． 为了模拟 GPx 活性部位的结构，已合成了多种类型的以 Ebselen 为代表的有机硒化合物［6］ ． 虽然引入个别氨基酸会使Ebselen 展示不同的 GPx 活力，但这些氨基酸残基对活性中心硒原子(Se)活性的影响尚不明确［7，8］ ．本文合成了由天然 GPx 催化三联体 U，W 和 Q 形成的 QUW，QWU，WQU，WUQ，UQW 和 UWQ6 个具有 GPx 活力的含硒三肽，研究了催化三联体中各氨基酸残基的活力贡献规律;并以肝癌为研究对象［9］ ，表征了活力最佳的 UWQ 抗肝癌细胞转移的能力． 本文结果对设计高活力含硒肽或氨基酸掺杂化合物等 GPx 模拟物，深入研究其抗癌机制具有一定的指导意义．1 实验部分1． 1 试剂与仪器N-芴甲氧羰基-N-叔丁氧羰基-L-色氨酸［Fmoc-Trp(Boc)-OH］、N-芴甲氧羰基-N-三苯甲基-L-谷氨酰胺［Fmoc-Gln(Trt)-OH］、N-芴甲氧羰基-N-叔丁氧羰基-L-色氨酸-4-苄氧基苄酯［Fmoc-Trp(Boc)-Wang-Ｒesin］、N-芴甲氧羰基-N-三苯甲基-L-谷氨酰胺-4-苄氧基苄酯［Fmoc-Gln(Trt)-Wang-Ｒesin］、N-羟基苯并三氮唑(HOBt)、三氟乙酸(TFA)和 1，2-乙二硫醇(EDT)，吉尔生化(上海)有限公司;N，N-二甲基甲酰胺(DMF)和乙腈，美国 TND 公司;还原型谷胱甘肽(GSH)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷(NADPH)、谷胱甘肽还原酶(GＲ)和辣根过氧化物酶(HＲP)标记的羊抗兔 IgG 二抗，