补硒过量会导致心衰吗（过量补心衰导致硒会降低吗）
补硒对自身免疫甲状腺炎患者血清硒蛋白P亚型影响研 中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果.据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。 .日期:丝丛厶. 论文作者签名:..立塑鸳 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师 为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容保密内容除外,以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名:圭望銎 指导教师签名:旦左垒罕 一、摘要中文论著摘要 英文论著摘要 二、英文缩略语? 三、论文 前言刖青?‘, 材料与方法? 实验结果讨论” 结论? 四、本研究创新性的自我评价 五、参考文献? 六、附录 致谢?”个人简介?中文论著摘要? 补硒对自身免疫甲状腺炎患者血清硒蛋白 亚型的影响 硒元素,是人体必需的微量元素,目前发现包括克山病、癌症、哮喘、心脏病、肝脏疾病、甲状腺疾病、关节炎和免疫系统功能紊乱等在内 腺激素的合成、活化和代谢过程,其中血清中硒蛋白主要由硒蛋白,组成,占血清硒蛋白/%,有两个亚型,其大小分别为 和,其中亚型含有较多的硒代半胱氨酸,具有较高的生物活性。
有研 究表明前列腺癌患者血清的表达低于正常对照组,等人研究发现结 肠癌患者血清 亚型所占比例 %明显低于正常对照组。 在甲状腺激素合成中期重要作用,甲状腺过氧化物酶抗体 ,是自身免疫甲状腺炎患者的主要自身抗体,也是重要的诊断指标,出现于几乎所有的桥本甲状腺 者、/的产后甲状腺炎患者以及.%的患者中,与结合后可抑制酶活性,使甲状腺激素合成减少。最近有研究表明补硒可以降低患 者血清甲状腺特异性自身抗体的滴度,减轻患者甲状腺内的炎症反应,但目 前还没有补硒对患者血清亚型的影响的研究。 本研究观察补硒后患者血清亚型的改变情况探讨,为临床补硒治 疗提供实验依据。 研究对象方法 一、研究对象 研究对象来自于医大一院就诊患者。共收集例甲功正常的患者,患者 血清睑『/,对患者进行硒干预,给予硒酵母./,观察个月,于给药后第月进行 随访。从沈阳市流行病学调查人群中选出正常对照组 二、方法对所有患者初诊时采血检测血清甲状腺功能、、、自身抗体 和血硒,并提取用于 分析。对所有患者在个月随访, 留取血液标本进行以上各项指标的检测。‘ 三、统计学处理应用 .软件处理和分析数据。参数计量资料:以平均值士标准差表示, 补硒前后比较采用配对样本检验,组间比较采用独立样本检验,方差齐同的 组比较采用单因素方差分析,方差不齐时使用非参数检验。
.判定为具有显著性差异。 结果 补硒后,有名患者血清未下降,定义为未下降组;名患 者血清下降,定义为下降组。 补硒治疗前各组 %分析:未下降组补硒前明显低于正常对 照组.:下降组补硒前%也明显低于正常对照组.; 未下降组与下降组补硒前%比较无差异.。 未下降组分析:初诊时 %显著低于正常对照组., 补硒治疗后 %比例显著升高尸.,但仍然显著低于正常对照组 下降组分析:初诊时%显著低于正常对照组., 补硒治疗后%比例显著升高.,且补硒治疗后 与正常对照组相比无差异尸.。 %升高率进行相关分析,显示患者血硒升高率和%升高率间并无明显相关。 结论 、补硒能使患者 的比例明显升高,而且补硒后下降 组%与正常对照组相比无差别,提示提高血清 %水平可影响 水平。 、补硒后硒浓度的升高幅度与 %的升高幅度无相关性,提示硒浓 度的升高幅度不影响%升高幅度。 关键词硒、自身免疫甲状腺炎、甲状腺过氧化物酶抗体、硒蛋白亚型 ?英文论著摘要. ‘?论文?补硒对自身免疫甲状腺炎患者血清硒蛋白 亚型的影响 自身免疫甲状腺炎,是一种常见的器官特异性 自身免疫病,以甲状腺滤泡和甲状腺细胞持续性进展性自身免疫破坏为特征, 清甲状腺过氧化物酶抗体,和/或甲状腺球 蛋白抗体水平升高,在甲状腺激素合成中期重要作用,与结合 后可抑制酶活性,使甲状腺激素合成减少,甲状腺病理显示淋巴细胞浸润, 甲状腺结构可以有不同程度的破坏【,随着甲状腺破坏,病人出现甲减,并需 长期.替代治疗,使甲状腺激素水平维持正常。
但是几乎所有患者的血清水平长时间处于升高状态,目前还没有针对这种炎症的特异的治疗方案。 硒是机体必需的微量元素,有研究表明缺硒与的发生发展有着很密切的 关系,和正常人相比,在不同阶段的患者中,血硒水平有所降低【’.,研究 发现严重的硒缺乏能够引起甲状腺细胞氧化损伤,进而导致甲状腺的损伤。 替代治疗的大鼠模型能够阻止这种氧化损伤。研究表明补硒能使患者体内的水平明显下降,但对于甲状腺功能没有明显的影响。硒主要以硒蛋白的 形式存在于体内各组织器官中,其中谷胱甘肽过氧化物酶、硫氧还蛋白还原 碘甲腺原氨酸脱碘酶以及硒蛋白,对甲状腺激素的合成代 谢起着至关重要的作用【。 是一种血浆硒蛋白,主要由肝脏合成,由两个亚型组成,其中 亚型含有多个硒代半胱氨酸,并具有较高的生物学活性【,是人体中唯一 一个每分子含有多种硒代半胱氨酸的硒蛋白,对硒的转运及将硒从肝脏转移 他组织起到重要作用。等人研究表明前列腺癌患者血清 中的表达显著低于正常对照组【,等人研究发现结肠癌患者血清 、具有甲状腺手术史和放射碘治疗史; 、一个月内曾应用免疫抑制剂或免疫调节剂如甘露聚糖肽、百灵胶囊、干 扰素、糖皮质激素、环磷酰胺等: 、正处于妊娠期或半年内有妊娠计划; 、或高于正常上限.倍和/或总胆红素高于正常上限.倍; 、白细胞/和/或血小板/和/或血红蛋白/.者;、严重的系统性疾病,如心衰分级/、恶性肿瘤、急性脑卒 中或遗留有严重后遗症。
没有认知能力或生活不能自理及不能合作的患者; 、明显胃肠道疾病不适合口服药物者; 、对试验药物过敏者。 二、试剂与仪器 、试剂 .螺旋离心柱 蛋白酶抑制剂咪唑 沈阳化学试剂厂 无水甲醇 沈阳化学试剂厂 浓盐酸 沈阳化学试剂厂 上海化学试剂公司 戊二醛 磷酸氢二钠 沈阳化学试剂厂 沈阳化学试剂厂 磷酸二氢钠 氯化钠 沈阳化学试剂厂 ,美国 过氧化物酶标记的兔抗小鼠 .氨基联苯胺过硫酸胺 异丙醇进口上海生工分装 辣根过氧化物酶标记二抗 中山生物技术有限公司 ,美国 化学发光检测系统,美国 、仪器 ,美国 精密计 微量加样枪 德国 ,美国 超纯水制备系统 美国 恒温摇床 ,美国 电子天平 恒温水浴箱 上海仪器总厂 海尔,青岛 冰箱 .深低温冰箱,日本凝胶成像系统 .,美国 .型转移脱色摇床 国产 蛋白电泳仪 .,美国 电转膜装置 .,美国 三、实验方法每例患者入组前进行甲状腺功能及甲状腺自身抗体检测,并进行病史采集, 符合入选标准者纳入队列,签署知情同意书;同时采集空腹血液标本,用于血 甲状腺功能、,抗体并提取血清测定对所有入组成员进行硒干预,给予硒制剂蚓硒酵母片,每次片,一天 次,持续给药个月,于给药后月留取血夜标本进行以上各项指标的检测。
、血清的提取与样品制备 的提取采用美虱公司的?提取试剂盒进行,按照说明操作。 加入混有蛋白酶抑制剂,美国的平衡液, 室温转离心分钟,弃去平衡液,将离心柱装回离心管;加入血清: 室温转离心分钟,更换新离心管; 加入混有蛋白酶抑制剂,美国的平衡液室温转离心 分钟,重复次; 更换新离心管; 加入混有蛋白酶抑制剂,美国的洗脱液, 室温转离心分钟。 按照提取样品:上样缓冲液叫:,于蛋白变性分钟用于、聚丙烯酰胺凝胶电泳. 模具准备:用小型垂直电泳装置,准备制胶。按下表制备分离胶,根据蛋白分子量,选择%的分离胶配制 总体积分离胶的注入和聚合:将分离胶混匀后,将配制好的分离胶溶液沿着凝 胶腔的长玻璃板一面缓慢加入到玻璃板的夹层中至凝胶高度为左右,预留 .高度配制积层胶,然后加入的异丙醇压胶。放置左右至聚合完全。 按下表制备浓缩胶.,浓度% :.%/丙烯酰胺:双丙烯酰胺 总体积用滤纸吸去分离胶上层覆盖的所有溶液,将浓缩胶混匀后尽快加入到玻璃板 夹层中分离胶之上至顶端,立即插入梳子,勿留气泡,有气泡时可以晃动梳子 气泡排出。凝胶聚合分钟。胶凝固后,将玻璃板夹上电泳架。电泳槽中倒入电泳缓冲液。 准备上样缓冲液的样品液:将蛋白样品与上样染液储存液按体积 :的比例混合。
每孔配制含总蛋白的样品液。上样前煮沸。 加样:先在上、下层电泳槽中加入电泳缓冲液,上层槽中缓冲液液面需超过 上样孔顶端~。电泳前拔去梳子,每孔均用电泳缓冲液清洗, 用微量加样器,将准备好的样品液依次加入各个样品槽内,每个样品槽内。 电泳:使用.电泳装置。于下进行凝胶电泳。上槽接负极, 下槽接正极。样品首先在恒定电压下电泳至染料接近分离胶顶端。然后 恒定电压电泳至溴酚蓝刚出胶底部时,停止电泳。 凝胶以考马斯亮兰染色或转膜。 、蛋白质转移 按下表配制转移缓冲液 加水至总体积为准备好蛋白转移装置夹板,凝胶用转移缓冲液稍微清洗。 转移缓冲液预湿滤纸,按照滤纸一凝胶膜滤纸的排列顺序 将其装配于转移装置上。 恒压条件下,转移分钟。 、封闭、杂交和显色 封闭:转膜完成后,将膜从转膜夹中取下,将贴胶的一面朝上的 放在封闭盒子中,加入封闭液。室温封闭小时。 封闭过的膜加入一抗稀释度:过夜。 加入标记的二抗以结合一抗及标记的抗生物素抗体稀释度:,室温孵育。 取出膜,用含.%、显影 将膜置于反应液中室温孵育。 去除过量的溶液,将膜曝光。 软件分析条带灰度值。以 将图片扫描保存为电脑文件,并用 所占比例。 条带灰度值/总灰度值反映每个样本中 四、统计学处理 应用 .软件处理和分析数据。
参数计量资料:以平均值士标准差表示, 补硒前后比较采用配对样本检验,组间比较采用独立样本检验,方差齐同的 组比较采用单因素方差分析,方差不齐时使用非参数检验。.判定为具有显著性差异。 结果 一、研究对象的一般情况 在例女性患者中,下降组例,未降组例,所有补 硒组患者都完成了个月的随访,正常对照组例。研究对象基本情况见表。 表,患者基本情况 患者补硒组 正常对照组 年龄岁表两组比较采用独立样本检验,患者组硒组与正常对照组之间年龄没有差 比值、对照组分析 血清 的比值无明显差异。 、补硒治疗前各组 %分析 未下降组补硒前明显低于正常对照组尸;下降组补硒 前%也明显低于正常对照组.;未下降组与下降组 补硒前%比较无差异.图。 下降组补硒前正常对照组 未降组补硒前
